來自西班牙的研究人員在Scientific reports上發(fā)表了題為“Adult peripheral blood and umbilical cord blood NK cells are good sources for effective CAR therapy against CD19 positive leukemic cells”的研究文章。該文章主要研究了來自成人外周血（AB）和臍帶血（CB）的NK細胞對不同靶細胞的作用，以確定CAR治療的最佳來源。

一、兩種來源NK細胞的體外擴增、CD19 CAR轉導情況：

通過陰性選擇從AB或CB PBMC中分離出NK細胞，結果顯示，從CB中分離得到的NK細胞多于從AB中分離得到的細胞。兩周后在CB NK細胞中觀察到略高的倍數(shù)擴增，但擴增倍數(shù)也較低，2周僅擴增2-3倍。 病毒轉導后，細胞存活率都隨著時間的推移而下降，到第 28天，兩種細胞來源的CAR-NK存活率都顯著下降到20%左右。在轉導效率方面，AB CAR-NK平均轉導效率為47.46%，而CB CAR-NK 轉導效率為 46.8%。AB和CB NK細胞的轉導效率之間沒有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異。不管是AB還是CB來源的NK細胞制備的CAR-NK，深圳細胞谷制備活率和純度均在90%以上，CAR轉導陽性率高達60~80%，擴增倍數(shù)可達上萬倍。

二、兩種來源的CD19-CAR-NK細胞在遇到表達CD19的細胞后引起脫粒

CD107a表面表達水平與NK細胞的細胞毒活性、細胞因子分泌之間存在直接相關性。本研究通過對細胞表面CD107a的表達來比較CD19 CAR-NK細胞與非轉導NK細胞對表達CD19細胞的脫顆粒能力。實驗結果顯示，轉導或未轉導CD19 CAR的AB和CB NK 細胞在K562存在下表現(xiàn)出類似的脫顆?；钚浴Ｔ贑D19陽性細胞（如Nalm-6、ALL和CLL原代患者腫瘤細胞）中，AB CD19 CAR-NK細胞比未轉導的AB NK細胞表現(xiàn)出更高的脫顆粒活性。CB CD19 CAR-NK細胞比未轉導的CB NK細胞表現(xiàn)出更高的脫顆粒活性。AB CD19 CAR-NK細胞相較于CB CD19 CAR-NK細胞CD107a的表達略高一點。

三、CD19-CAR轉導的NK細胞更有效地殺死表達CD19的細胞

本研究檢測了兩種來源的非轉導NK細胞和CD19 CAR-NK細胞在不同效應靶比下的細胞毒性活性。AB和CB CAR-NK細胞比未轉導的NK細胞更好地裂解表達CD19的靶細胞。AB CD19 CAR-NK細胞在10:1比例殺傷Nalm-6的能力、10:1和5:1比例殺傷ALL的能力、1:1比例殺傷CLL細胞的能力顯著優(yōu)于CB CD19-CAR NK細胞。另一方面，在10:1和5:1的比例下，CB CD19-CAR NK細胞裂解CLL細胞的能力顯著增強?？偨Y：不管是對ALL還是CLL原代患者腫瘤細胞，AB來源CD19-CAR NK細胞殺傷能力明顯優(yōu)于CB來源。

綜上所述，AB CAR-NK細胞在殺死表達CD19的靶細胞方面表現(xiàn)稍好，而CB NK細胞單位細胞數(shù)較為穩(wěn)定，可通過不同的白介素刺激提高體外擴增、殺傷活性和存活率。上述實驗說明這兩種來源的CAR-NK細胞都有其優(yōu)勢，均可以作為CAR治療的替代和更安全的候選細胞，都適合未來臨床應用CAR-NK治療血液病。

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